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微孔板恒溫振蕩器在牛奶抗原抗體反應(yīng)的應(yīng)用

更新時(shí)間：2011-09-22   點(diǎn)擊次數(shù)：4385次

溶液的配制

 

1、稀釋抗體溶液：將抗體濃縮液搖勻，用緩沖液10倍稀釋抗體濃縮液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

2、稀釋酶結(jié)合物：將酶結(jié)合物濃縮液搖勻，用緩沖液10倍稀釋酶結(jié)合物濃縮液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

3、底物溶液的配制：用底物緩沖液10倍稀釋底物濃縮液，根據(jù)需要的量現(xiàn)用現(xiàn)配，底物溶液變藍(lán)禁止使用。

 

七、樣品的前處理方法：

 

    牛奶：新鮮牛奶或解凍牛奶50µL，加水950µL，1：20稀釋，作樣品液備用。

 

八、檢測(cè)步驟：

 

1、剪開(kāi)錫箔袋，按每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液和樣品提取液2孔計(jì)算所需微孔板條的數(shù)量，插入框架。

 

2、各取系列標(biāo)準(zhǔn)液和樣品液20µL分別加到其對(duì)應(yīng)微孔中，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品加雙孔。

 

3、每孔加稀釋好的酶結(jié)合物20µL。

 

4、每孔加稀釋好的抗體100µL，在MicBio-IV微孔板恒溫振蕩器上*混勻，用封口膜封好，室溫孵育30分鐘。

 

5、倒出孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍打，使孔中沒(méi)有殘留的液體。使用多道移液器，每孔加水250µL，再傾倒干凈。如此洗板，重復(fù)三次。

 

6、每孔加底物溶液100µL，室溫避光孵育30分鐘。

 

7 、每孔加終止液100µL，混勻。

 

8 、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值。60分鐘內(nèi)讀數(shù)。

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